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HCECs人角膜上皮細胞包郵

更新時間:2025-06-01

簡要描述:

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細胞復蘇

把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。

把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。

把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動,使培養皿中的細胞均勻分布。

標好細胞種類和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。

3天換一次培養基。


細胞培養過程中,從實驗室的設計到實驗過程中的操作,都需要嚴格控制無菌。由于細胞對于生長的條件比較苛刻,所以無論從實驗室的設計,還是使用的物品及細胞培養的操作過程,都要注意保持無菌環境。



傳代方法:細胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細胞*脫離瓶壁分離成單個細胞后棄掉胰酶,加培養基混勻分瓶,T25瓶中加培養基至6-8ml,T75瓶加培養基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養。

培養是生物學和醫學研究zui常用的手段之一,可分為原代培養和傳代培養兩種。原代培養是直接從生物體獲取細胞進行培養。由于細胞剛剛從活體組織分離出來,故更接近于生物體內的生活狀態。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段,同時也為以后傳代培養創造條件。利用此方法還可直接服務于臨床實踐。



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實驗無菌技術:

實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后,才開始實驗操作。

每次操作只處理一株細胞株,且即使培養基相同亦不共享培養基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢

將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后,再進行下一個細胞株的操作。

無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。

實驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在臺面的中央無菌區域,勿在邊緣的非無菌區域操作。

小心取用無菌的實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口,亦不要在打開的容器正上方操作實驗。

容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

工作人員應注意自身的安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。


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